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生物电镜冷冻制样:做了才知道有多难

2015/6/8 11:32:31      点击:

台湾中央研究院植物暨微生物学研究所简万能博士作了题为“Ultrastructure of plant cells using high pressure freezing and freeze substitution”的报告。


 

免费qq视频在线观看   据介绍,由于早年看到所有的教科书都说想要获得更好的电镜观察结果,就要用冷冻制样技术,简万能便开始了这方面的研究,然而不做不知道,一做才知道有多难。冷冻制样对于动物来说比较简单,而对于植物来说由于细胞壁的影响却非常难。20年来,在研究当中,他碰到的失败的次数永远比成功多。“但是当你成功后,你会发现你的眼界比以前做化学固定大得多。”简万能这样说道。

  “电镜是生物学研究非常有用的工具。由于生物细胞的含水量可以达到80%-90%,所以制样能否成功主要是解决水的问题。传统的透射电镜制样技术,对样品损伤最大的步骤是脱水,往往使得细胞结构发生很大的变化。而利用冷冻制样最大的优点就是可以保持细胞原来的结构,并保持一些可溶性的物质。如果要做溶在细胞质里的元素分析,一定要采用冷冻制样技术。”

  由于水在冷冻的过程中会形成冰晶影响观察,所以在如何避免形成冰晶是冷冻制样的一个关键点。简万能表示:“在制样中一定要注意一些关键的温度节点。如-137℃是水的重结晶点,如果能迅速降低到这一温度,样品中的水就会形成玻璃态的冰。如果超过-70℃,玻璃态的冰就会形成二次冰晶。”

  在报告中,简万能介绍了目前常用的冷冻方法,如投入式冷冻、冷金属块撞击式冷冻、丙烷喷射冷冻、高压冷冻等。并指出高压冷冻的优点是可以做活的生物样品,可以做超过200μm厚的样品。

  此外,简万能还介绍了在冷冻固定之后,如何更好的实现冷冻置换。他表示,如果要做超薄切片,高压冷冻和冷冻置换是最好的选择,可以获得非常好的样品形态,会有更多的信息被保留。

  在研讨会之后,简万能博士亲自指导参加培训的学员,进行了投入冷冻、高压冷冻、冷冻置换等实验操作。

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